4.1. Методы контроля. Химические факторы

Методические указания МУК 4.1.1973-05
"Определение остаточных количеств эпоксиконазола в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом газожидкостной хроматографии"

(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005 г.)

Дата введения: 1 июля 2005 г.

Введены впервые

1. Вводная часть

Действующее вещество: эпоксиконазол.

(2RS,3SR)-1-[3-(2-хлорфенил)-2,3-эпокси-2-(4-фторфенил)пропил]-1Н-1, 2,4-триазол (ИЮПАК).

цис-1-[[3-(2-хлорфенил)-2-(4-фторфенил)оксиранил] метил]-1Н-1,2,4-триазол (С.А.).

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₁₇H₁₃ClFN₃O.

Молекулярная масса: 329,8.

Бесцветное кристаллическое вещество без запаха.

Температура плавления: 136,2 °С.

Давление паров при 20 °С: менее 0,01 мПа.

Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_owlogP = 3,44 (рН 7).

Растворимость (г/л) при 20 °С: ацетон - 144, дихлорметан - 291, н-гептан - 0,4; вода - 6,6 мг/л.

Вещество стабильно при нормальных условиях хранения, не гидролизуется в водном растворе при различных значениях температуры и рН.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс - более 5000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс - более 2000 мг/кг, острая ингаляционная токсичность (LC₅₀) для крыс - более 5,3 мг/л воздуха. Эпоксиконазол не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз кролика. LC₅₀ для рыб - 2,2 - 6,8 мг/кг (96 ч).

Эпоксиконазол нетоксичен для пчел, дождевых червей, птиц, дафний и водорослей.

Гигиенические нормативы

МДУ в сахарной свекле 0,1 мг/кг.

Область применения препарата

Эпоксиконазол - системный фунгицид широкого спектра действия из класса триазолов. Высокоэффективен против возбудителей ржавчины, мучнистой росы, пятнистостей листьев и колоса зерновых культур.

2. Методика определения остаточных количеств эпоксиконазола в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на газохроматографическом определении эпоксиконазола на неподвижной фазе SE-30 с использованием электронозахватного детектора (ЭЗД) после экстракции его из растительного материала водным ацетоном, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания сахарной свеклы.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Таблица

Метрологическая характеристика метода

 

2.2. Реактивы, растворы и материалы

 

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

 

2.4. Отбор проб

Отбор образцов проводится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (№ 2051-79 от 21.08.79).

Отобранные пробы ботвы и корнеплодов хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более двух дней; при длительном хранении (не более трех месяцев) пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С. Перед анализом ботву и корнеплоды измельчают и отбирают усредненную пробу.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворитель последовательно промывают водой, 2,5 %-м раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.

Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г KMnO₄ и 2 г K₂CO₃).

Этилацетат промывают равным объемом 5 %-го раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.

Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 150 °С в течение 3 ч.

2.5.2. Подготовка и кондиционирование колонки

Готовую насадку (3 % SE-30 на Хромосорбе W/HP) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 270 °С в течение 8 - 10 ч.

2.5.3. Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор эпоксиконазола с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,8 % д.в., в ацетоне в мерной колбе емкостью 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.

Рабочие растворы с концентрациями 0,05; 0,1; 0,25 и 0,5 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора эпоксиконазола соответствующим последовательным разведением ацетоном. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более недели.

2.5.4. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора эпоксиконазола с концентрацией 0,05; 0,1; 0,25 и 0,5 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение площади хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ х с от концентрации эпоксиконазола в растворе в мкг/мл.

2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 0,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 10 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 20 мл смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) и 20 мл гексана со скоростью 1 - 2 капли в с, после чего она готова к работе.

2.5.6. Проверка хроматографического поведения эпоксиконазола на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 1 мл стандартного раствора эпоксиконазола с концентрацией 1 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) и наносят на колонку. Промывают колонку 50 мл смеси гексан-ацетон (8:2) и затем 40 мл смеси гексан-ацетон (6:4) со скоростью 1 - 2 капли в с. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл этилацетата и анализируют на содержание эпоксиконазола по п. 2.7.1.

Фракции, содержащие эпоксиконазол, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 4 мл этилацетата и вновь анализируют по п. 2.7.1. Рассчитывают содержание эпоксиконазола в элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента.

Примечание. Профиль вымывания эпоксиконазола может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

2.6. Описание определения

2.6.1. Экстракция эпоксиконазола и очистка экстракта

К навеске (25 г) измельченной ботвы или корнеплодов добавляют 100 мл смеси ацетон-вода (80:20, по объему), гомогенизируют 3 мин при 10000 об/мин. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл смеси ацетон-вода (80:20). Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 32 мл), эквивалентную 5 г растительного материала, и упаривают ее до водной фазы на роторном вакуумном испарителе при температуре 40 °С. Водный остаток переносят в делительную воронку емкостью 100 мл, приливают 15 мл насыщенного раствора хлорида натрия и 30 мл гексана и содержимое встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев отделяют гексановую фазу и собирают ее в колбу емкостью 100 мл. Оставшуюся водную фазу обрабатывают гексаном еще два раза (по 30 мл). Объединенный гексановый экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия в грушевидную колбу емкостью 200 мл и затем упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.2.

2.6.2. Очистка на колонке с силикагелем

Остаток в колбе, полученный при упаривании экстракта растительного материала из п. 2.6.1, количественно переносят тремя 1-мл порциями смеси гексан-ацетон (8:2) в подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Промывают колонку 40 мл элюента № 1, элюат отбрасывают. Эпоксиконазол элюируют 30 мл элюента № 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Полученный раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток растворяют в 5 мл этилацетата и анализируют на содержание эпоксиконазола по п. 2.7.1.

2.7. Условия хроматографирования

2.7.1. Метод ГЖХ с насадочными колонками

Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с электронозахватным детектором  с пределом детектирования по линдану не выше 8,2×10^-15 г/см³.

Колонка хроматографическая, стеклянная, 1 500×3 мм; неподвижная фаза - 3 % SE-30 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм).

Температура детектора 320 °С, испарителя 270 °С, термостата колонки 230 °С.

Скорость потока газа-носителя (азота) - 40 мл/мин.

Объем вводимой пробы - 2 мкл.

Время удерживания эпоксиконазола - 2 мин 10 с.

Предел детектирования - 0,1 нг.

Линейный диапазон детектирования - 0,1 - 1,0 нг.

Альтернативная фаза: 3 % OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм), хроматографическая колонка 1 500×3 мм; температура детектора 320 °С, инжектора 270 °С, термостата колонки 255 °С.

Время удерживания эпоксиконазола - 3 мин 25 с.

Каждую анализируемую пробу вводят три раза и вычисляют среднюю площадь пика.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.

2.7.2. Метод ГЖХ с капиллярными колонками

Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с электронозахватным детектором  с пределом детектирования по линдану не выше 8,2×10^-15 г/см³.

Колонка капиллярная кварцевая ZB-1, 30 м×0,32 мм×0,5 мкм (SE-30).

Температура термостата испарителя - 270 °С, детектора - 320 °С, термостата колонки по следующей программе: 170 °С - 2 мин; 25 °С/мин до 250 °С; выдержка - 10 мин.

Газовый режим: газ-носитель - азот, общий расход - 22,5 мл/мин; газ для поддува в детектор - азот, расход - 19,3 мл/мин.

Деление потока: 1:6.

Абсолютное время удерживания эпоксиконазола: 9 мин 10 с.

Объем вводимой пробы - 1 мкл.

Линейный диапазон детектирования: 0,025 - 0,5 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,2 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание эпоксиконазола рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

где

Х - содержание эпоксиконазола в пробе, мг/кг;

Н₁ - площадь пика анализируемой пробы, мВ х с;

H₀ - площадь пика стандартного раствора, мВ х с;

А - концентрация стандартного раствора эпоксиконазола, мкг/мл;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

m - масса анализируемой части образца, г (для ботвы и корнеплодов - 5 г).

3. Требования техники безопасности

Соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с легко воспламеняющимися жидкостями, токсичными веществами, электронагревательными приборами, сосудами, работающими под вакуумом.

4. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

5. Разработчики

Назарова Т.А., Микитюк О.Д., Л.В. Дубовая, А.М. Макеев,

ВНИИ фитопатологии, 143050 Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.

 

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко